Impurezas Tirzepatida

Impurezas de Tirzepatida|Controle de impurezas de tilpeptídeo|Síntese personalizada de impurezas e confirmação de estrutura|Ciência-Peptídeo

Controle de impurezas de tirzepatida - para GLP-1/GIP dual-pesquisa de qualidade de medicamentos alvo, relatórios de medicamentos genéricos. O Peptide científico- fornece síntese personalizada de impurezas relacionadas ao tilpeptídeo, incluindo peptídeos de exclusão, impurezas oxidadas, produtos de esfoliação de ácidos graxos, dímeros, etc., com dados de confirmação estrutural para apoiar seu estudo de espectroscopia de impureza com dados de confirmação estrutural. Bem-vindo a entrar em contato conosco.

Tirzepatide (Tirzepatide) é o agonista duplo GLP{3}}1/GIP que a Eli Lilly criou e está em pleno andamento há dois anos. Tem um bom efeito na redução do açúcar e um forte efeito na redução do peso, e é chamada de versão atualizada da "droga milagrosa para perda de peso". Fabricantes nacionais de medicamentos genéricos peptídicos, muitos estão olhando para isso - após o vencimento da patente, quem poderá primeiro analisar a qualidade da pesquisa, quem terá a oportunidade de adquirir o primeiro genérico.

 

No entanto, a qualidade do tilpeptídeo não é tão fácil de estudar. É mais complexo que a simeticona, com 39 aminoácidos, uma cadeia lateral de ácido graxo (ácido eicosanodióico) e um ligante. As impurezas que podem aparecer durante o processo de síntese são muito superiores às dos peptídeos comuns. Peptídeos ausentes, impurezas oxidativas, produtos de liberação de ácidos graxos, dímeros, impurezas relacionadas a ligantes, cada um precisa ter um controle, cada um precisa ser transparente.

 

Acumulamos muita experiência na síntese de impurezas peptídicas complexas. Nos especializamos no estudo do tilpeptídeo e sabemos quais são as dificuldades no seu perfil de impurezas e quais são os itens essenciais de controle. Podemos personalizar a síntese de vários controles de impureza de tilpeptídeo de acordo com suas necessidades, com dados de confirmação de estrutura, e ajudá-lo a estabelecer o método para que seja menos provável que você receba um suplemento no momento do depósito.

A estrutura molecular do tilpeptídeo determina que seu perfil de impurezas é muito mais complexo do que o dos peptídeos gerais. Quando fazemos estudos de impurezas, nos concentramos principalmente nestas categorias:

Peptídeo ausente
Os 39 aminoácidos, qualquer um deles perdido durante o processo de síntese, são uma impureza. Os tempos de retenção dos peptídeos ausentes na HPLC foram amplamente distribuídos, com diferentes polaridades dos peptídeos ausentes em diferentes posições. Alguns estão faltando no terminal N-, alguns no meio e alguns perto do local de ligação dos ácidos graxos. Recebemos um pedido de um cliente de 15 peptídeos ausentes em diferentes posições para localizar todas as possíveis impurezas ausentes em seu processo.

Impurezas oxidantes
Met na sequência do tilpeptídeo é suscetível à oxidação em sulfóxido e depois em sulfona. As impurezas oxidadas aparecem frequentemente em estudos de estabilidade e crescem após um período de tempo. Fizemos uma comparação, em condições aceleradas durante um mês, o pico de oxidação pode crescer para mais de 0,3%, sem controle.

Produtos de eliminação de ácidos graxos
Esta é uma impureza exclusiva do tilpeptídeo. Sua cadeia lateral de ácido graxo (ácido eicosanodióico) é ligada à lisina por meio de um ligante, e essa modificação pode ser parcialmente eliminada durante a síntese ou armazenamento, resultando na remoção de impurezas do ácido graxo-. Mais problemático, a eliminação pode ocorrer em locais diferentes - entre o ácido graxo e o ligante, ou entre o ligante e o peptídeo - resultando em diferentes impurezas. Sintetizamos diversas impurezas relacionadas a ácidos graxos-para nossos clientes, desde a eliminação completa até apenas uma pequena seção.

Dímeros/polímeros
Duas ou mais moléculas de tilpeptídeo se agrupam para formar um dímero ou superior. O peso molecular do dímero é duas vezes maior que o do pico principal, e muitas vezes é um pico amplo em HPLC, por isso deve ser especialmente separado e purificado antes de poder ser usado como controle. Fizemos a preparação dos dímeros e foram necessárias várias rodadas de purificação para atingir uma pureza superior a 95%.

Impurezas-relacionadas ao vinculador
A modificação de ácidos graxos do tilpeptídeo usa um ligante (por exemplo, -Glu, PEG, etc.), e esse próprio ligante pode produzir reações colaterais durante a síntese, gerando impurezas com ligantes ausentes ou incompletos. Esse tipo de impureza não é encontrado em peptídeos comuns, mas é exclusivo do tilpeptídeo, que precisa ser estudado especificamente.

Impurezas desamidadas
A asparagina (Asn) e a glutamina (Gln) são facilmente desamidadas sob condições ácidas ou de aquecimento, resultando em isômeros. Existem vários Asn e Gln na sequência do tilpeptídeo, e a impureza de desamidação aparece frequentemente no teste de degradação forçada, portanto o produto de controle deve ser usado para localizar a impureza.

Diastereoisômeros
Durante a síntese de cadeia longa, aminoácidos individuais podem sofrer racemização, resultando em diastereoisômeros. O teor desse tipo de impureza geralmente não é alto, mas os especialistas vão perguntar na hora da declaração, e é melhor ter um produto de controle para confirmação.

Muitas dessas impurezas não podem ser compradas e precisam ser sintetizadas de forma personalizada. Fizemos muitos projetos de customização de impurezas de tilpeptídeos, cobrindo todas as categorias acima.

A deleção da série de peptídeos
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, com confirmação por MS e RMN. Sintetizamos um conjunto de peptídeos com espaçamento de 5 aminoácidos do terminal N- ao terminal C-.

Impurezas oxidantes
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95% e podemos fornecer o espectro LC-MS para confirmar o grau de oxidação. O sulfóxido e a sulfona são separados por HPLC e podemos fazer as duas coisas.

Produtos de eliminação de ácidos graxos
Esta é uma das impurezas mais difíceis de trabalhar no tilpeptídeo. A cadeia do ácido graxo pode estar completamente desfeita ou parcialmente desfeita (por exemplo, faltam os últimos carbonos). Podemos sintetizar uma série de variantes para diferentes posições da cadeia. Em um dos projetos mais complicados que realizamos, o cliente nos pediu para sintetizar uma impureza com 8 carbonos faltando na cadeia de ácidos graxos e levamos dois meses para acertar.

Dímero
Dímeros formados por ligações-cruzadas ou interações não{1}}covalentes podem ser preparados por diferentes métodos e isolados e purificados para fornecer controles de alta pureza. Os dímeros são trabalhosos de purificar, mas temos experiência para saber como separar os monômeros.

Impurezas-relacionadas ao vinculador
O ligante (-Glu, PEG, etc.) pode estar ausente ou incompleto, resultando em uma série de impurezas relacionadas. Podemos sintetizar várias variantes com ligantes ausentes, ligantes encurtados ou ligantes incompatíveis e ajudá-lo a construir os espectros de tais impurezas.

Impurezas desamidadas
Para os locais Asn e Gln na sequência, podemos preparar controles de impureza desamidados por degradação forçada ou síntese direcionada. A diferença no peso molecular após a desamidação é de apenas 1, o que não é fácil de distinguir pela MS, por isso geralmente usamos RMN ou condições cromatográficas especiais para confirmar.

Outras impurezas personalizadas
Se você encontrar uma nova impureza desconhecida em sua pesquisa, podemos ajudá-lo a analisar a estrutura e sintetizá-la. Envie-nos as amostras, faremos a análise LC{1}}MS, deduziremos a estrutura, depois a síntese direcional e depois compararemos o tempo de retenção e o espectro de massa para confirmar a concordância. Já fizemos esse processo muitas vezes e a taxa de sucesso é bastante alta.

Desenvolvimento e validação de método analítico
Ao configurar um método HPLC ou LC{0}}MS, um controle de impurezas é necessário para localização, determinação de separação, verificação de faixa linear e recuperação. Sem o controle, falta uma peça na validação do método. Muitos clientes nos pedem para fazer algumas impurezas principais primeiro para configurar o método e, em seguida, preparar lentamente o resto.

Espectrometria de massa heterogênea
Quando um medicamento genérico é declarado, é necessária uma análise qualitativa e quantitativa abrangente das impurezas do processo e dos produtos de degradação. A localização, conteúdo e estrutura de cada impureza precisam ser confirmados por um produto de controle. Vimos que a declaração da informação foi enviada para preenchimento, nove em cada dez vezes é que as impurezas desta peça não foram compreendidas.

Estudos de estabilidade
Na estabilidade-de longo prazo e nos testes acelerados, é necessário determinar quais produtos de degradação são dominantes e qual é a tendência no conteúdo. Com o controle de impurezas, podemos quantificar e monitorar com precisão. Um cliente estava fazendo a estabilidade da preparação de tilpeptídeo e descobriu que um pico de degradação crescia muito rápido sob condições aceleradas, então analisamos e sintetizamos por MS para confirmar a estrutura, e então o cliente ficou aliviado em relatá-lo.

Teste de liberação em lote
Após a comercialização, cada lote de IFA ou formulação precisa ser testado para a substância em questão. Os controles de impurezas são ferramentas essenciais para testes de liberação.

Informações sobre declarações de medicamentos genéricos
Os estudos de impurezas são uma seção importante das informações de arquivamento. Fornecer perfis completos de impurezas e dados de controle reduz significativamente o risco de uma liberação de revisão.

Caso 1: uma empresa farmacêutica, programa de medicamentos genéricos tilpeptídeo
Eles estão desenvolvendo uma versão genérica do tilpeptídeo e precisam de um conjunto completo de controles de impurezas para validação do método. Personalizamos 12 impurezas para eles: 5 peptídeos ausentes, 2 impurezas oxidadas, 1 dímero, 2 produtos de eliminação de ácidos graxos e 2 impurezas relacionadas ao ligante. Cada um deles tem pureza superior a 95% e é acompanhado por dados de MS e RMN. O líder do projeto disse: “As impurezas do tilpeptídeo são o dobro de outros peptídeos, mas você pode produzir todas elas e os dados estão completos, o que nos poupa muito trabalho”. Posteriormente, a validação do método foi concluída com sucesso e agora eles estão se preparando para a declaração.

Caso 2: Uma empresa CRO, perfil de impurezas
Eles realizaram um projeto de pesquisa de qualidade sobre tilpeptídeo, que exigiu uma análise abrangente das impurezas do processo. Eles nos enviaram as amostras brutas de peptídeos, e realizamos análises de LC-MS, deduzimos as possíveis estruturas de várias impurezas desconhecidas, depois as sintetizamos de maneira direcionada e comparamos tempos de retenção e espectros de massa, e confirmamos quatro novas impurezas - duas delas eram relacionadas ao ligante-, e duas delas eram variantes de eliminação de ácidos graxos. O cliente usou esses dados para refinar os perfis de impurezas e passou com êxito na aceitação do cliente.

Caso 3: Estudos de estabilidade, uma empresa de biotecnologia
Eles estavam examinando a estabilidade de uma formulação de tilpeptídeo e descobriram que a quantidade de um produto de degradação aumentava rapidamente sob condições aceleradas, mas não sabiam o que era. Analisamos a amostra por LC-MS e presumimos que era uma impureza de desamidação em um determinado local da Asn, e então a sintetizamos de maneira direcionada e a confirmamos por comparação. Eles estabeleceram um ensaio utilizando este controle e monitoraram com precisão a tendência do produto de degradação. Posteriormente, quando apresentaram o relatório, esta parte dos dados foi enfatizada pelos especialistas e, devido aos dados sólidos, nenhuma compensação foi emitida.

O tilpeptídeo é um produto popular, mas o estudo de impurezas é uma tarefa delicada, especialmente produtos de esfoliação com ácidos graxos e impurezas-relacionadas a ligantes, que muitos fabricantes não conseguem lidar. Se você estiver fazendo pesquisas de qualidade ou desenvolvimento genérico de tilpeptídeo e precisar de controles de impurezas, não hesite em nos contatar. Fizemos muito trabalho, sabemos quais são as dificuldades e sabemos como sair.